人胰岛素样生长因子-1基因的克隆及在真核细胞的表达

摘要

目的构建人胰岛素样生长因子-1(IGF1)真核表达载体,并在成纤维细胞NIH3T3细胞内进行表达.方法用RT-PCR法从人肝细胞中克隆人IGF1的基因,将其连人真核表达载体pSec Tag/FRT/V5-His,PCR法及测序鉴定阳性克隆;用脂质体法将阳性克隆转染NIH3T3细胞;收集转染后的细胞上清,用Western blot进行检测.结果琼脂糖电泳显示RT-PCR扩增出315bp的条带;与载体连接后的克隆进行测序得到一个阳性克隆;Western blot检测显示转染后细胞上清出现与预计值相符的特异性条带.结论成功克隆并构建人IGF1基因的真核表达载体,转染后NIH3T3细胞成功表达IGF1重组蛋白.