'痹痛方'对胶原诱导关节炎模型小鼠血清和关节组织中炎症因子表达的影响

摘要

目的:观察痹痛方对胶原诱导关节炎(Collagen Induced Arthritis,CIA)模型小鼠血清和关节组织中炎症因子表达的影响,探讨痹痛方治疗类风湿关节炎的抗炎作用机制.方法:将50只DBA/1小鼠随机分为5组,每组10只,分别为空白对照组、模型组和痹痛方小、中、大剂量组.除空白对照组外,其余各组采用牛Ⅱ型胶原诱导关节炎小鼠模型.造模成功后,痹痛方小、中、大剂量组分别予痹痛方0.108、0.432、1.728g/kg灌胃,模型组和空白对照组灌胃等量生理盐水,每日1次,连续灌胃28d.末次灌胃后处死小鼠并取材,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中白介素-6(IL-6)、IL-10、IL-17、肿瘤坏死因子(TNF-α)的表达,实时荧光定量法(RT-PCR)检测小鼠关节组织中炎症因子IL-6、IL-10、IL-23和干扰素γ(IFN-γ)、干扰素γ受体1(IFN-γR1)、IFN-γR2 mRNA的表达,免疫印迹分析法(Western Blot)检测小鼠关节组织中IL-6和IL-10蛋白的表达,苏木精-伊红染色法(HE)观察关节组织形态变化,免疫组织化学法(IHC)检测小鼠关节中IL-6的表达.结果:干预结束后,模型组小鼠血清中IL-6、IL-17、TNF-α表达,关节组织中IL-6、IFN-γR1 mRNA和IL-6蛋白表达均较空白对照组明显升高(P<0.001,P<0.01).HE染色和IHC显示模型组小鼠关节腔界限不清晰,腔内狭窄,大量炎性细胞浸润,可见大量的IL-6阳性细胞表达.痹痛方各剂量组小鼠血清中IL-6水平,关节组织中IL-6、IL-10、IFN-γR1 mRNA和IL-6蛋白表达均明显低于模型组(P<0.05,P<0.01,P<0.001);痹痛方小剂量和大剂量组小鼠关节组织中IL-23 mRNA表达明显低于模型组(P<0.05);痹痛方小剂量和中剂量组小鼠关节组织中IL-10蛋白表达明显低于模型组(P<0.05,P<0.01).病理结果示,痹痛方各剂量组小鼠关节炎症减轻,IL-6表达减少.痹痛方各剂量组之间比较,血清中IL-17、TNF-α,关节组织中IL-6、IL-10、IL-23、IFN-γR1 mRNA和IL-6、IL-10蛋白的表达均有统计学差异(P<0.05,P<0.01,P<0.001).结论:痹痛方可减轻胶原诱导关节炎模型小鼠关节炎症,其可能的作用机制为抑制IL-6为主的炎症因子的表达,同时升高抑炎因子IL-10的表达.