高致病性禽流感病毒H5N1亚型核蛋白NP真核表达载体的构建、表达与鉴定

摘要

目的 构建高致病性禽流感病毒H5N1亚型核蛋白(NP)的真核表达载体,并在哺乳动物细胞中表达、鉴定其编码重组蛋白NP.方法 采用RT-PCR法扩增NP基因,T-A克隆到pMD18-T载体中构建pMD18-T-NP质粒.经PCR、双酶切鉴定后,双酶切阳性质粒与pXJ40-HA载体,电泳后胶回收,连接目的片段,构建pXJ40-HA-NP质粒,经PCR、双酶切、测序分析鉴定为阳性的质粒即为NP蛋白的真核表达载体.转染293T细胞后,采用免疫印迹法(Western blot)鉴定重组NP蛋白的表达.结果 成功构建了高致病性禽流感病毒H5N1亚型NP基因的真核表达载体,并在293T细胞中成功表达出分子量为56kD的重组蛋白.结论 成功构建的NP蛋白真核表达载体为进一步研究其功能,研发商致病性禽流感病毒H5N1亚型的诊断、治疗方法和疫苗奠定了基础.