荧光定量PCR法评价核黄素光化学法灭活全血病毒的效果

摘要

目的 了解荧光定量PCR法(qPCR)评价核黄素光化学法灭活含疱疹病毒8型(HHV-8)全血的效果.方法 在常规检测合格的全血中,分别加入含105、106、107 copy/mL HHV-8的淋巴细胞BC-3和核黄素,以40～160 J/mLRBc的紫外光辐照进行病毒灭活.以HHV-8ORF26为中心设计4对PCR套式扩增引物(产物长度为2 998、1 252、561、206 bp),构建和优化PCR预扩增条件,以qPCR检测灭活前、后4个片段在不同辐照条件下的扩增产物经梯度稀释的Ct值,计算相应的病毒滴度ALog值,以评估对病毒核酸的损伤情况.结果 核黄素光化学法对全血中HHV-8核酸有损伤作用,PCR预扩增HV-1(2 998 bp)片段可用于评估辐照后HHV-8的病毒核酸损伤情况.病毒滴度ALog值随着病毒滴度、辐照强度和扩增片段长度的增加,最高达1.9 Log值.结论 在HHV-8高流行区缺乏常规血液筛查HHV-8方法情况下,可采用核黄素光化学法进行体外灭活,降低其传播的可能性.