转基因油菜W-4 T-DNA旁侧序列分析与事件特异性检测

摘要

W-4是通过农杆菌介导法将fad2基因的反向重复序列表达框转入甘蓝型油菜Westar后获得的转基因高油酸油菜品系.本研究应用温度不对称PCR (TAIL-PCR)技术扩增获得转基因油菜W-4的T-DNA插入位点的左、右旁侧序列.其中右边界旁侧序列长度为290 bp,其碱基组成G+C含量为31.27％、A+T含量为68.73％;左边界旁侧序列长度为365 bp,其碱基组成G+C含量为32.6％、A+T含量为67.4％,表明该T-DNA整合在富含A/T区.依据左、右边界旁侧序列和转基因载体的T-DNA左右边界序列设计的2对特异性引物TLF/TLR和TRF/TRR,能从W-4基因组DNA中扩增出大小分别为485 bp和405 bp预期产物,而在其他转基因油菜、非转基因油菜的基因组DNA和空白对照中均无特异性扩增产物,据此建立了W-4的转基因事件特异性PCR检测技术.应用该检测技术可以从含有0.1％ W-4基因组DNA的昆合样品中扩增出特异产物,检测灵敏度达到0.1％.表明应用该技术可对W-4转基因事件进行特异性检测.