内质网应激对非酒精性脂肪性肝病细胞线粒体凋亡影响研究

摘要

目的 探讨内质网应激对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)细胞模型中线粒体途径凋亡的影响.方法 采用油酸诱导HepG2细胞建立非酒精性脂肪变性细胞模型,将实验细胞分为对照组、造模12 h组、造模16 h组和4-苯基丁酸(4-PBA,加入内质网抑制剂)组,BODIPY 493/503染色检测细胞内脂肪变性;采用Ho-echst 33258染色观察各组细胞凋亡情况及Annexin V-FITC/PI双染法检测各组HepG2细胞凋亡率;采用JC-1法检测各组细胞线粒体膜电位(MMP)变化.采用免疫蛋白印迹(Western blot)检测内质网应激蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)及线粒体途径凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的以及细胞质细胞色素C(CytC)的表达.结果 与对照组相比,造模组细胞内脂质沉积明显增加;与造模16 h组相比,4-PBA组细胞内脂质沉积明显降低.Hoechst 33258染色及Annexin V-FITC/PI双染法检测提示与对照组相比,造模后细胞凋亡增加;与造模16 h组相比,4-PBA组细胞凋亡率明显降低.JC-1法检测显示与对照组相比,造模后细胞MMP下降,加用4-PBA后细胞MMP升高.Western blot检测显示造模后细胞Bax、Caspse-3、GRP78、CHOP、胞质CytC蛋白表达增加,而Bcl-2表达降低;加用4-PBA后细胞GRP78、CHOP、Bax、Caspse-3、胞质CytC蛋白表达降低,而Bcl-2表达增加.结论 内质网应激可诱导NAFLD细胞线粒体途径凋亡.