基于多重PCR和第二代高通量测序技术快速检测下呼吸道感染病原微生物方法的建立和应用

摘要

目的 针对引起下呼吸道感染的20种常见病原微生物,建立一种基于多重PCR和第二代高通量测序技术的快速、高通量检测方法 AC-seq.方法经生物信息学分析,设计20种下呼吸道感染常见病原微生物特异性引物并通过PCR评估引物的敏感性和特异性.建立可进行第二代高通量测序技术的多重PCR扩增体系.采集34例临床肺泡灌洗液标本,对检测方法进行初步测试,并与临床培养结果 进行对比评估检测效果.结果所有引物均具有良好的敏感性和特异性.在临床标本检测中AC-seq共检出13种病原微生物,培养法检出8种;AC-seq检测阳性率为79.41％,培养法为32.35％,差异有统计学意义(P<0.05).AC-seq检测灵敏度为100％,与培养法的一致率为50％.检测时间比培养法缩短至少1 d.结论 基于多重PCR和第二代高通量测序技术,成功建立了一种检测下呼吸道感染20种常见病原微生物的快速、高通量的方法.