miR-182通过靶向调节细胞周期蛋白依赖性激酶1促进由氧化应激诱导的HLE-B3细胞凋亡

摘要

目的探讨 miR-182 在氧化应激诱导下的人晶状体上皮细胞(human lens epi-thelium cells , HLE-B3)凋亡引起白内障发生时的保护作用.方法通过实时定量 PCR (real-time quantitative polymerase chain reaction , qRT-PCR)检测由 H2O2(100 μmol/L , 12 h) 刺激的HLE-B3 细胞中 miR-182 的表达.通过 qRT-PCR 和 Western 印迹检测由 H2O2刺激 HLE-B3 细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶1 (cyclin dependent kinase 1 , CDK1)的表达.同时通过 qRT-PCR检测白内障患者和正常健康的患者晶状体前囊膜中 miR-182 和 CDK1 表达.通过生物信息学方法(targetscan 和 miRanda) ,预测 miR-182 潜在的靶基因, Luciferase 报告方法确认 miR-182的靶基因.通过 Western 印迹检测凋亡相关蛋白(Bax、Bad、caspase-3)及靶基因 CDK1 蛋白的变化.结果研究发现, miR-182 在人白内障晶状体前囊膜样品和由 H2O2诱导的 HLE-B3细胞中相对于正常对照组表达上调, CDK1 表达相对于正常对照组降低.过表达 miR-182 能够逆转由 H2O2诱导的 HLE-B3 细胞凋亡.转染 miR-182-inhibitor 后 CDK1 在 mRNA 和蛋白水平表达上调.Luciferase 报告检测结果显示 CDK1 是 miR-182 的直接靶基因.转染 miR-182 mimic 12 h 后,氧化应激刺激12 h ,能够下调 CDK1 的表达,转染 miR-182-inhibitor 12 h 后,氧化应激刺激12 h ,能够上调 CDK1 的表达.而转染过表达 miR-182 后能够逆转由 H2O2诱导的 HLE-B3 细胞中凋亡相关蛋白 Bax、Bad 和 caspase-3 下调.结论研究证明, miR-182 是白内障的功能基因,能够逆转由氧化应激诱导的 HLE-B3 细胞凋亡,而这些功能是通过调控CDK1 表达实现的.这些结果表明, miR-182/CDK1/Rb/P16INK4a的信号通路是一种新型的影响白内障的发生、发展的因素.