阿司匹林诱导人结肠癌细胞Caco-2凋亡与Lgr5的关系

摘要

目的 研究阿司匹林对人结肠癌细胞株Caco-2的生长作用以及对Lgr5表达的影响,探讨其预防结肠癌发生的可能机制.方法 运用噻唑蓝(MTT)比色法检测阿司匹林对Caco-2细胞存活率的影响;流式细胞术分析不同药物浓度和不同时间对Caco-2细胞凋亡的影响;采用实时-反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定各组阿司匹林干预不同时间后Caco-2细胞中Lgr5 mRNA表达;免疫组化Envison法检测阿司匹林对Lgr5蛋白在Caco-2细胞内定位变化.结果 阿司匹林对Caco-2细胞增殖有抑制作用,且有明显的浓度和时间依赖性;对Caco-2细胞促凋亡作用(包括早期凋亡和总凋亡)呈明显的浓度和时间依赖性,不同浓度组和不同时间组与对照组比较均差异有统计学意义(均P＜0.05);阿司匹林呈时间依赖性地抑制Caco-2细胞中Lgr5 mRNA的表达,各实验组与对照组比较均差异有统计学意义(均P＜0.05);Lgr5蛋白在Caco-2细胞中大量表达,主要位于细胞质,少数定位于细胞膜,而细胞核不着色;5.0 mmol·L-1组中Lgr5蛋白亚细胞定位与对照组相同,10.0 mmol·L-1组和15.0 mmol·L-1组可见Lgr5蛋白亚细胞定位发生了改变,除了细胞膜、细胞质有表达外,细胞核也有表达.结论 阿司匹林通过抑制Lgr5基因的表达,并影响Lgr5蛋白亚细胞定位,呈时间和浓度依赖性地抑制体外培养的结肠癌Caco-2细胞的存活以及促进细胞凋亡,可能是阿司匹林防治结直肠癌的重要机制之一.