杯苋甾酮通过上调miR-204表达抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡的实验研究

摘要

目的:探讨杯苋甾酮对微小RNA(miR)-204表达及白细胞介素(IL)-1β 诱导的软骨细胞凋亡的影响.方法:体外培养人正常软骨细胞C28/I2,设置①对照组(不做处理)、IL-1β 组(50mg/L IL-1β)、低剂量杯苋甾酮组(2.5mg/L杯苋甾酮+50mg/L IL-1β)、中剂量杯苋甾酮组(5mg/L杯苋甾酮+50mg/L IL-1β)和高剂量杯苋甾酮组(10mg/L杯苋甾酮+50mg/L IL-1β);②正常对照组(不转染)、阴性对照组(转染NC-siRNA)和miR-204 siRNA组(转染miR-204 siRNA),三组均加入50mg/L IL-1β、10mg/L杯苋甾酮处理;流式细胞仪检测各组C28/I2细胞凋亡情况;酶联免疫(ELISA)法检测各组C28/I2细胞上清液中炎症因子IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子 α(TNF-α)水平;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组C28/I2细胞中miR-204表达情况;蛋白印迹(WB)法检测各组C28/I2细胞中细胞色素C(Cytochrome C)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱天冬酶-3(Caspase-3)蛋白表达情况.结果:与对照组相比,IL-1β组C28/I2细胞活力、miR-204表达水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、IL-6、IL-8、TNF-α表达水平及Cytochrome C、Bax、Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与IL-1β 组相比,随着杯苋甾酮剂量的增加,C28/I2细胞活力、miR-204表达水平逐次升高(P<0.05),细胞凋亡率、IL-6、IL-8、TNF-α表达水平及Cytochrome C、Bax、Caspase-3蛋白表达水平逐次降低(P<0.05);与阴性对照组相比,miR-204 siRNA组相比凋亡率显著升高(P<0.05).结论:杯苋甾酮可能通过上调miR-204表达对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡具有抑制作用.