胰岛细胞药物筛选模型的建立——小鼠胰岛的原代培养

摘要

目的:用胰岛细胞作为糖尿病新药的细胞筛选模型需保持其结构完整、生理功能稳定和足够长的存活时间,为此本文对小鼠胰岛分离纯化和培养方法进行优化.方法:用胶原酶、透明质酸酶和DNA酶消化,Ficoll 400密度梯度离心法分离胰岛；DTZ染色法和台盼兰染色测定胰岛的纯度和活力;放射免疫方法检测胰岛分泌水平变化.结果:0.1％胶原酶/0.1％透明质酸酶/0.1％ DNase-I(v/v)为4:2:0.5的消化酶体系,采用4℃和37C两步消化法可得到较高纯度和活力的胰岛；用聚赖氨酸作培养基质能稳定地维持胰岛分泌功能,且相对成本低廉.原代小鼠可以体外存活6周,维持稳定分泌功能10d.结论:采用上述消化、培养方法,原代小鼠胰岛能保持完整的结构并能在较长的时间维持其胰岛素分泌功能.