miR-338-3 p靶向FBXW7调控ox-LDL诱导的内皮细胞氧化应激和凋亡

摘要

目的 探讨微小RNA-338-3p(miR-338-3p)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化应激和凋亡的影响及作用机制.方法 HUVECs细胞分为空白组、ox-LDL组(50 mg/L ox-LDL诱导细胞)、ox-LDL+anti-miR-338-3p组(ox-LDL诱导转染miR-338-3p抑制剂的细胞)、ox-LDL+anti-miR-con组(ox-LDL诱导转染miR-338-3p抑制剂阴性对照序列的细胞)、ox-LDL+anti-miR-338-3p+si-F框/WD-40域蛋白7(FBXW7)组(ox-LDL诱导共转染miR-338-3p抑制剂与FBXW7小干扰RNA的细胞)和ox-LDL+anti-miR-338-3p+si-con组(ox-LDL诱导共转染miR-338-3p抑制剂与乱序无意义阴性序列的细胞).实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-338-3p和FBXW7 mRNA表达水平,蛋白印迹(Western blot)法检测FBXW7和活化的半胱天冬酶-3(Cleaved caspase-3)蛋白表达水平,酶联免疫吸附法检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)含量及细胞中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽还原酶(GSH-Px)的活力,流式细胞仪检测细胞凋亡.双荧光素酶报告基因实验验证miR-338-3p与FBXW7调控关系.结果 与空白组比较,ox-LDL组miR-338-3p水平、MDA和LDH含量、细胞凋亡率和Cleaved caspase-3蛋白表达升高(P<0.05),FBXW7 mRNA和蛋白水平、GSH-PX和SOD活力降低(P<0.05).与ox-LDL+anti-miR-con组比较,ox-LDL+anti-miR-338-3p组MDA和LDH含量、凋亡率和Cleaved caspase-3蛋白表达降低(P<0.05),GSH-PX和SOD活力升高(P<0.05).与ox-LDL+anti-miR-338-3p+si-con组比较,ox-LDL+anti-miR-338-3p+si-FBXW7组MDA和LDH含量、细胞凋亡率和Cleaved caspase-3蛋白表达升高(P<0.05),GSH-PX和SOD活力降低(P<0.05).miR-338-3p在HUVECs细胞中靶向负调控FBXW7表达.结论 抑制miR-338-3p表达通过靶向上调FBXW7来抑制ox-LDL诱导的HUVECs细胞氧化应激和凋亡,保护细胞损伤.