茯苓提取物以miR-649/Akt1通路调控AngⅡ诱导血管平滑肌细胞的增殖、迁移和侵袭机制

摘要

目的 探讨茯苓提取物对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制.方法 AngⅡ诱导VSMCs细胞,茯苓提取物作用后,四甲基噻唑蓝染色法(MTT)检测细胞增殖,Transwell检测细胞的迁移和侵袭能力,Western Blot检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、上皮性钙粘附蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(Akt1)和磷酸化的Akt1(p-Akt1)蛋白表达,实时荧光定量PCR检测miR-649表达.转染miR-649模拟物至VSMCs细胞,上述方法检测miR-649过表达对AngⅡ诱导VSMCs细胞增殖、迁移和侵袭及相关蛋白表达的影响.双荧光素酶报告基因实验验证miR-649与Akt1靶向关系.结果 AngⅡ诱导可促进VSMCs细胞增殖、迁移和侵袭,Cyclin D1和MMP-2蛋白、miR-649表达(P<0.05),抑制P21、E-cadherin、Akt1和p-Akt1蛋白表达(P<0.05).茯苓提取物可抑制AngⅡ诱导的VSMCs细胞增殖、迁移和侵袭及Cyclin D1和MMP-2蛋白、miR-649表达(P<0.05),促进P21、E-cadherin、Akt1和p-Akt1蛋白表达(P<0.05).过表达miR-649与茯苓提取物具有相似的功能,可抑制AngⅡ诱导的VSMCs细胞增殖、迁移和侵袭及Cyclin D1和MMP-2蛋白表达(P<0.05),促进P21和E-cadherin蛋白表达(P<0.05).miR-649在VSMCs细胞中靶向负调控Akt1表达,抑制miR-649表达逆转了茯苓提取物对AngⅡ诱导的VSMCs细胞增殖、迁移和侵袭及相关蛋白Cyclin D1、P21、E-cadherin、MMP-2和Akt1、p-Akt1蛋白表达的影响.结论 茯苓提取物可抑制AngⅡ诱导的VSMCs的增殖、迁移和侵袭,其可能通过调控miR-649/Akt1发挥作用.