miR-204靶向SIRT1基因调控高糖作用下视网膜色素上皮细胞增殖的分子机制

摘要

目的 探讨miR-204通过靶向沉默信息调节因子1(SIRT1)对高糖作用下视网膜上皮细胞ARPE-19细胞增殖的调控作用及分子机制.方法 以30 mmol/L葡萄糖体外处理ARPE-19细胞,采用脂质体转染法将miR-204 inhibitor和NC-inhibitor转染至ARPE-19细胞,将ARPE-19细胞分为正常葡萄糖组(NG组)、高糖组(HG组)、阴性对照组(anti-NC组)和miR-204转染组(anti-miR-204组).采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ARPE-19细胞中miR-204的表达水平,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测细胞中ARPE-19细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)和SIRT1蛋白表达,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力.通过TargetScan等数据库预测miR-204与SIRT1互补结合位点,采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-204和SIRT1的靶向关系.结果 与NG组比较,HG组ARPE-19细胞中miR-204的表达水平明显升高(P<0.05),PCNA和SIRT1蛋白表达明显下调(P<0.05),细胞增殖能力明显降低(P<0.05).与HG组和anti-NC比较,anti-miR-204组ARPE-19细胞中miR-204的表达水平明显降低(P<0.05),PCNA和SIRT1蛋白表达明显上调(P<0.05),细胞增殖能力明显升高(P<0.05).生物信息学预测结果 显示miR-204与SIRT1存在互补结合位点.双荧光素酶报告基因实验检测结果 显示miR-204和SIRT1能够靶向结合.结论 高糖作用下视网膜上皮细胞中miR-204的表达上调,抑制miR-204的表达可靶向SIRT1逆转高糖诱导的ARPE-19细胞增殖抑制.