绿色糖单孢茵麦芽糖α-淀粉酶基因在枯草芽孢杆菌中的高效分泌表达

摘要

[目的]构建高产麦芽糖a-淀粉酶的工程菌株并实现高效分泌表达.[方法]PCR扩增麦芽糖a-淀粉酶基因sva,再与大肠杆菌-枯草芽孢杆菌麦芽糖诱导型穿梭载体pHCMCO4-Pglv连接,构建重组质粒pHCMCO4-Pglv-sva并转入枯草芽孢杆菌进行表达,对重组酶进行SDS-PAGE分析,然后对重组菌株的生长及发酵条件进行优化.[结果]成功构建重组质粒pHCMCO4-Pglv-sva并在枯草芽孢杆菌中实现分泌表达,SDS-PAGE分析发现,在55 kDa处得到特异性蛋白条带.单因素试验结果显示,重组菌的最适诱导温度为35℃,最适接种量为4％(V/V),最适装液量为30 mL.正交实验结果显示,重组菌的最佳发酵条件组合是诱导温度37℃、接种量5％(V/V)、装液量25 mL,在此条件下发酵液粗酶活力达到257.3698 U/mL.装液量对重组菌的产酶量影响显著.[结论]成功构建能高效分泌表达麦芽糖a-淀粉酶的枯草芽孢杆菌工程菌株,经发酵条件优化后,重组酶产量显著提高10倍左右.