甲基化转移酶样蛋白3在急性心肌梗死患者外周血中的表达及对缺氧缺血所致心肌细胞损伤的调节作用

摘要

目的 探讨甲基化转移酶样蛋白3(METTL3)在急性心肌梗死患者外周血中的表达及对急性缺氧/缺血(HI)所致心肌细胞损伤的调节作用.方法(1)收集60例急性心肌梗死患者和60例健康者的血浆和血清,采用酶联免疫吸附测定法和实时荧光定量聚合酶链反应法分别检测血清和血浆中METTL3的表达水平.(2)取人心肌细胞AC16,分为对照组、HI-2h组、HI-4h组、siMETTL3+HI-2h组、siNC+HI-2h组;对照组不进行任何处理,HI-2h组、HI-4h组使用1％O2和1％胎牛血清培养基诱导HI心肌细胞模型,siMETTL3+HI-2h组、siNC+HI-2h组分别转染有效沉默METTL3的小干扰RNA序列、阴性对照小干扰RNA序列后建立HI心肌细胞模型.检测各组AC16细胞的增殖率和凋亡率,METTL3、激活型天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(cleaved-Caspase3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax).将溶酶体抑制剂巴弗洛霉素A1添加至培养基后,按照上述方法进行分组及干预,检测微管相关蛋白1轻链3 B-Ⅱ(LC3 B-Ⅱ)、人死骨片1(SQSTM1)的蛋白表达水平.结果(1)心肌梗死患者血浆METTL3 mRNA相对表达水平以及血清中METTL3表达水平均高于健康者(P<0.05).(2)与对照组比较,HI-2h组、HI-4h组AC16细胞的增殖率降低,细胞凋亡率升高,METTL3蛋白、cleaved-Caspase3蛋白、Bax/Bcl-2比值、SQSTM1蛋白的表达上调,而LC3B-Ⅱ的蛋白表达下调(均P<0.05).与HI-2h组和siNC+HI-2h组比较,siMETTL3+HI-2h组的细胞增殖率升高,细胞凋亡率降低,METTL3、cleaved-Caspase3、Bax/Bcl-2比值、SQSTM1的蛋白表达下调,LC3B-Ⅱ的蛋白表达上调(均P<0.05).结论 METTL3在心肌梗死患者体内和HI诱导的急性心肌细胞损伤模型中的表达均升高,沉默METTL3可以抑制HI心肌细胞的凋亡并增加自噬通量,从而促进细胞增殖的恢复.