蛋白酪氨酸磷酸酶PTP1B真核载体的构建及对K562细胞的影响

摘要

目的初步研究作为p210负性调控物的PTP1B,探讨其对K562细胞凋亡、红系分化的影响.方法应用RT-PCR法克隆PTP1B全长cDNA序列并定向亚克隆于真核表达载体pcDNA3.0,应用脂质体转染技术使PTP1B在K562细胞中过表达.结果PTP1B在K562细胞中出现超表达并具有较高PTP活性.转染48h后,K562细胞凋亡不明显,Annexin V-PI双标后FACS分析细胞凋亡率为7.54%,与转染空载体(6.44%)相比,差异无显著性.PTP1B基因转染后细胞出现明显红系分化,联苯胺染色细胞阳性率(28.67±1.25)%,GPA表达率为43.15%,与转染空载体组(3.34±1.25)%和12.88%比较显著提高.结论应用RT-PCR法可以成功克隆出PTP1B基因全长cDNA序列,脂质体法能有效地将pcDNA3-PTP1B转入K562细胞并表达.PTP1B能诱导K562细胞出现明显红系分化,但对细胞的凋亡无明显影响.