一步稀释对在不同冷冻保护剂中冷冻的体外受精牛胚胎体外培养和直接移植的影响

摘要

本研究的目的是确定甲基cellosolve（MC）二甘醇（DEG）、甘醇（EG）和1,2-丙三醇（1、2Propanediol PG）对冷冻的牛体外受精胚胎在支持培养基中进行体外培养和直接移植对其直接用水气是否有益的作用。 仅将具有致密卵丘且用已获能精子受精的牛卵母细胞在添加有5％超排牛血清（SCS）中,培养20—22小时（38.5℃,5％CO2）。7—8日龄胚胎在1.3M甲基cellosolve（MC）,1.1M二甘醇（DEG）,1.8M甘醇（EG）,1.6M丙三醇（PG）和1.1M buthylene glycol（BG）溶液中平衡10分钟,再装入0.25毫升塑料细管中,于0℃放进酒精冷冻机中,然后以-1℃/分钟从0℃降至-6℃植冰,保持10分钟,再以-0.3℃/分或-0.5℃/分降到-30℃。在将塑料管入液氮中保存。在30℃水浴中解冻后,把胚胎放入TCM-199中（内含5％SCS）培养48小时,进行胚胎的直接再水化。解冻后发育至较晚阶段且形态好的胚胎被认为是存活的。将放入每种冷冻保护剂中的某些胚胎在不去掉冷冻保护剂的情况下进行非手术移植,在冷冻 和直接再水化期间,对于保护孵化胚胎的浓度来说1.8M EG（64.3％）和1.3M MC（54.5％）,1.1M DEG（60.0％）要优于其他浓空。胚胎冷冻的速度中（0.3℃/分和0.5℃/分）没有明显差异（P≤0.05）,但是以0.3℃降温时,体外培养后形成孵化胚胎的比率为64.6％（31/48）;而以0.5℃/分冷冻的则为2