猫尿调节蛋白重组蛋白制备

摘要

试验旨在获得高纯度猫尿调节蛋白(Feline Uromodulin,fUMOD)重组蛋白,并为之后制作单克隆抗体提供实验基础。采用大肠杆菌表达外源蛋白的方法,将fUMOD基因克隆至原核表达载体pET-SUMO中,经双酶切和测序鉴定阳性的重组质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,以终浓度为0.5 mM的IPTG诱导表达,采用镍柱进行重组蛋白纯化,SDS-PAGE检测重组蛋白。双酶切及测序结果显示,猫UMOD基因成功插入pET-SUMO,未出现碱基突变;SDS-PAGE结果显示,重组蛋白分子质量为54 ku。