转录因子STAT1两个亚型STAT1α和STAT1β高表达载体的构建及鉴定

摘要

目的利用高表达载体pLJM1-EGFP构建并鉴定转录因子STAT1基因的2个亚型STAT1α和STAT1β的过表达重组质粒(简称为pLJM1-STAT1α和pLJM1-STAT1β)。方法以大鼠肝脏cDNA为模板,PCR获取目的片段(即STAT1α和STAT1β);用AgeⅠ和EcoRⅠ双酶切pLJM1-EGFP表达载体和PCR扩增的STAT1α和STAT1β基因片段后,用T4DNA连接酶连接酶切纯化后的载体及目的基因片段;将连接产物转化DH5α大肠杆菌感受态细胞、挑选阳性克隆,并通过PCR、双酶切和DNA测序鉴定构建的重组质粒。结果 PCR和双酶切证实pLJM1-STAT1α和pLJM1-STAT1β重组载体中分别成功插入了STAT1α和STAT1β基因片段。DNA测序结果表明插入的STAT1α和STAT1β基因片段的序列完全正确。结论成功构建了pLJM1-STAT1α和pLJM1-STAT1β高表达重组载体。