非洲猪瘟病毒p30蛋白卵黄抗体的制备及生物活性检测

摘要

为了制备非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p30蛋白卵黄抗体,研究卵黄抗体的生物活性。试验构建了pET-32a-p30原核表达载体,制定了科学的免疫程序和样本采集方法。提取卵黄液,进行二次盐析,得到对应的卵黄抗体。用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定卵黄抗体效价,用免疫印迹(Western blotting)技术对其生物活性进行鉴定。ELISA试验表明:首次免疫p30蛋白7 d后,能够在蛋鸡的血清中检测出抗体(IgY),14 d后在卵黄中能够提取到IgY,35 d后IgY效价达到最高值。IgY具备和哺乳动物产生的IgY不同的生物活性,并可具有较高的特异性和稳定性,在免疫学研究中具有重要的价值。利用IgY进行实验检测,具有突出优势。通过抗原即ASFV p30蛋白免疫蛋鸡,分离提纯免疫蛋白,检测其生物活性,可用于鉴定非洲猪瘟。