黄曲霉尿酸氧化酶在毕赤酵母中的分泌表达及纯化

摘要

10.3969/j.issn.1674-506X.2012.04-006%　　从黄曲霉(Aspergillus flavus)中钓取尿酸氧化酶(UOX)基因,并将该基因以正确的阅读框插入到载体pPIC9K,构建成pPIC9K-UOX重组分泌表达载体.用Sal I线性化处理重组表达载体,电击法转化毕赤酵母(GS115)感受态细胞,G418浓度梯增法筛选多拷贝阳性转化子.0.5%甲醇诱导后的上清经SDS-PAGE电泳检测,证明重组尿酸氧化酶成功分泌到培养基中；由阴离子层析柱纯化产物,目的蛋白纯度可达90%；体外活性测定具有分解尿酸的能力.毕赤酵母(GS115)成功分泌表达了黄曲霉尿酸氧化酶.