人结膜上皮细胞的培养鉴定及液氮冻存

摘要

目的:探索人眼结膜上皮细胞体外培养和细胞保存的最佳方法,建立人结膜上皮细胞系,进一步研究人结膜的病理、生理特点及为毒理试验提供可靠的细胞模型。方法:分别用组织块培养法、机械分离法及混合消化液培养法体外培养正常成年人结膜上皮细胞,通过观察细胞形态、生长特性并用原位免疫组化方法鉴定培养细胞;收集第3代和第4代融合的细胞液氮冻存,保存30天后复苏,观察复苏成功率。结果:3种取材方法中,混合消化液培养法细胞生长繁殖较快,培养细胞形态多样,贴壁生长。免疫组化Keratin染色阳性,细胞冻存复苏的成功率均达到90％。组织块培养法细胞生长比较缓慢,而机械分离法细胞未见贴壁生长。结论:混合消化液培养法是人结膜上皮细胞培养的最佳方法,通过液氮冻存可保存培养的人结膜上皮细胞。眼科学报2000;16:135-138。