菊花总黄酮及其含药血清对去势干眼雄兔和细胞模型的炎症机制研究

摘要

目的 观察菊花总黄酮和其含药血清对去势干眼雄兔泪腺组织和干眼细胞模型中IL-1β、TNF-α、TGF-β1、AR和NF-κB表达的影响.方法(1)取150只雄性日本大耳白兔随机分为5组,每组30只,分别为正常组(A组)、假手术组(B组)、模型组(C组)、雄激素对照治疗组(D组)和菊花总黄酮治疗组(E组).干预后,处死动物,取材用于相关指标检测.C组、D组、E组行双侧去势术建立白兔干眼症模型.E组白兔用菊花总黄酮灌胃治疗,D组用雄激素肌肉注射,A组、B组、C组用生理盐水灌胃.全部白兔行泪液分泌实验,并检测泪膜破裂时间,处死后取泪腺组织,观察泪腺组织中相关炎性因子表达的病理学改变,并采用免疫组织化学法检测泪腺组织中IL-1β、TNF-α和TGF-β1的表达,采用荧光半定量PCR法定量检测TGF-β1 mRNA的表达.(2)建立雄激素水平下降所致干眼的细胞凋亡模型.设立无雄激素培养空白对照组、含雄激素培养对照组、无雄激素培养黄酮治疗组.以MTT法摸索含药血浆最佳干预加入量;Western blot以及QPCR法检测泪腺上皮细胞中AR mRNA、NF-κB磷酸化蛋白及TGF-β1的表达情况;观察菊花总黄酮的拟雄激素效应.结果(1)A组、B组、D组、E组的IL-1β和TNF-α表达显著低于C组,差异有统计学意义(P<0.05);A组、B组、C组的TGF-β1表达量显著低于D组和E组,差异有统计学意义(P<0.05);RT-PCR结果显示:A组、B组、D组与E组的TGF-β1 mRNA的相对表达量显著高于C组,差异有统计学意义(P<0.05),D组和E组的TGF-β1 mRNA相对表达量高于A组或B组,差异有统计学意义(P<0.05).(2)MTT法检测后计算得出干预细胞的最终浓度为13.2％;含菊花黄酮血浆干预组及丙酸睾酮干预组中AR蛋白、NF-κB及TGF-β1的表达增强,与空白组间的差异显著(P<0.01);菊花总黄酮含药血浆干预组中NF-κB表达量显著低于丙酸睾酮干预组(P<0.01).结论 菊花总黄酮通过抑制去势雄兔干眼模型泪腺组织中IL-1β和TNF-α的表达,增加TGF-β1 mRNA的合成进而增加TGF-β1,从而抑制干眼雄兔的泪腺组织炎症反应.而菊花总黄酮含药血浆可促进AR mRNA表达,从而上调NF-κB表达,进一步使泪腺上皮细胞TGF-β1蛋白表达上调,通过调节相关蛋白进而抑制炎症反应的发生,缓解干眼症状.