phbB、phbC基因在大肠杆菌中的表达及对马铃薯植株的转化和检测

摘要

利用从真养产碱杆菌（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓｅｕｔｒｏｐｈｕｓ）Ｈ１６染色体ＤＮＡ中克隆到的催化聚β羟基丁酸酯（ｐｏｌｙβｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒａｔｅ，ＰＨＢ）生物合成的两个关键酶基因：依赖ＮＡＤＰＨ的乙酰乙酰ＣｏＡ还原酶基因（ｐｈｂＢ）以及ＰＨＢ合酶基因（ｐｈｂＣ），同时利用大肠杆菌高效表达载体ｐＫＫ２２３３，构建了嵌合有ｐｈｂＢ和ｐｈｂＣ基因的表达载体ｐＫＣＢ，转入大肠杆菌ＪＭ１０９，通过显微镜观察及气相色谱分析检测ＰＨＢ的合成。在确证克隆基因正确的基础上构建了马铃薯块茎特异性表达载体ｐＰＳＡＧＢ（含ｐｈｂＢ基因）、ｐＢＩＢＧＣ（含ｐｈｂＣ基因）和ｐＰＳＡＧＣＢ（含ｐｈｂＢ和ｐｈｂＣ双基因），转化５个马铃薯品种，经检测获得２０个转基因阳性株系。