基因治疗研究中有复制能力逆转录病毒的检测

摘要

在反转录病毒介导的基因治疗研究的过程中，建立了有复制能力的反转录病毒（ＲＣＲ）的检测系统，包括ＤＮＡ聚合酶链式反应（ＰCＲ）、反转录ＰＣＲ（ＲＴ／ＰＣＲ）、Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交以及ｎｅｃ基因和β－ｇａｌ基因的补救分析（Ｒｅｓｃｕｅａｓｓａｙ）。从ＤＮＡ水平、ＲＮＡ水平和病毒活体水平对野生型病毒进行了灵敏而特异的检测，套式ＰＣＲ灵敏度达２．５个拷贝，并利用该检测系统检测了血友病Ｂ基因治疗和脑胶质瘤基因治疗的靶细胞及有关样品，所有结果均为阴性，没有检测到野生型反转录病毒。为基因治疗临床试验的安全进行奠定了基础。