低氧预处理通过上调钙网蛋白表达减轻大鼠心肌细胞氧化应激损伤

摘要

本文旨在探讨钙网蛋白(calreticulin,CRT)是否参与低氧预处理(hypoxic preconditioning,HPC)对心肌细胞氧化应激损伤的保护及其信号转导过程。将原代培养的Sprague-Dawley乳鼠心肌细胞随机分为8组:氧化应激(H2O2)组、短暂低氧(HPC)组、HPC+H2O2组、SB203580(p38 MAPK特异性抑制剂)+HPC+H2O2组、干扰心肌细胞CRT表达的反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides,AS)组、AS+H2O2组、AS+HPC+H2O2组和对照组,以细胞存活率、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出及流式细胞术检测细胞损伤情况;采用RT-PCR和Westernblot分别检测CRT表达和p38MAPK磷酸化水平。结果表明:(1)HPC可减轻氧化应激损伤,与H2O2组比较,HPC+H2O2组细胞存活率增高18.0%,细胞凋亡率和LDH漏出分别降低19.4%和53.0%(均P<0.05);HPC前以SB203580预孵育可消除HPC保护作用,与HPC+H2O2组相比,SB203580+HPC+H2O2组细胞凋亡率和LDH漏出分别增高13.1%和96.0%,存活率降低7.3%(均P<0.05);(2)氧化应激明显上调CRT表达(H2O2组较对照组高7.1倍,P<0.05);HPC也诱导CRT表达上调(HPC组较对照组高2.4倍,P<0.05),但上调程度较H2O2组低59%(P<0.05);即HPC可减轻氧化应激诱导的CRT过表达;(3)AS干扰CRT表达后,HPC保护作用降低,相关性分析显示HPC诱导的CRT适度表达与细胞存活率呈正相关(r=0.8023,P<0.05);(4)HPC前SB203580预孵育可抑制CRT表达上调(分别较HPC+H2O2组和HPC组低75%和53%,均P<0.05)。上述结果提示,HPC可能通过p38MAPK信号途径诱导CRT表达上调,减轻心肌细胞氧化应激损伤。