慢病毒介导的AP-1基因沉默对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡及Survivin表达影响的研究

摘要

目的 探讨慢病毒介导的AP-1基因沉默对卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡以及Survivin表达的影响.方法 基于RNA干扰技术构建慢病毒载体AP-1-shRNA,测定病毒滴度.实时荧光定量PCR及Western blot验证并筛选AP-1-shRNA沉默AP-1效果.将沉默效果最佳的载有AP-1-shRNA的慢病毒感染SKOV3细胞作为实验组,未感染病毒及感染空载体病毒SKOV3细胞作为对照组,用MTT法及Annexin V-APC观察SKOV3细胞增殖、凋亡情况,并用实时荧光定量PCR、Western blot检测SKOV3细胞Survivin表达.结果 经测序证实,成功构建AP-1-shRNA-1/2/3三组慢病毒,病毒滴度均大于2×108 TU/mL.实时荧光定量PCR及Western blot验证三组病毒均能在mRNA及蛋白水平沉默AP-1的表达,其中AP-1-shRNA-3沉默效果最佳,用于后续实验.沉默AP-1后,SKOV3细胞增殖受到抑制、凋亡增加、Survivin mR-NA转录水平和蛋白表达水平降低.结论 慢病毒介导的AP-1基因沉默可致卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制、凋亡增加,其机制可能与Survivin的下调有关.