液相色谱-串联质谱法分析新红细胞生成刺激蛋白的肽质量指纹图谱和糖肽结构

摘要

新红细胞生成刺激蛋白(NESP)是一种复杂的糖蛋白类药物,主要用于治疗慢性肾衰引起的贫血,含有5个N-连接和1个O-连接的糖基化位点。本研究建立了液相色谱-串联质谱法分析NESP的肽质量指纹图谱和糖肽结构。采用胰蛋白酶将所有糖基化位点酶解成肽段,分别采用高效液相色谱(HPLC)及两性离子亲水相互作用色谱(ZIC-HILIC)分析。与HPLC相比,ZIC-HILIC对O-糖肽的分离效果较理想,质谱信号响应也更强。在此基础上,尝试采用ZIC-HILIC对非特异性蛋白酶链霉蛋白酶E(Pronase E)酶解肽段进行分析。根据MS/MS碎片信息,一共鉴定了3种类型的O-糖肽,其糖链组成为GalNAcGal(Neu Ac)_2、GalNAcGal(NeuAc)_1和GalNAcGal。