构建siRNA慢病毒载体抑制A549细胞株VEGF受体KDR基因的表达

摘要

目的 构建针对血管内皮生长因子(VEGF)受体KDR基因的siRNA慢病毒载体,鉴定其对肺癌细胞株A549基因干扰效果.方法 设计合成针对KDR编码区的三条siRNA序列及阴性对照序列,克隆到PGCL-GFP载体,构建重组质粒,行PCR鉴定、DNA测序分析;转染人肺癌细胞株A549,Real-Time PCR及Westem blot分别检测KDR mRNA、蛋白水平变化;细胞计数法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞周期.结果 成功构建pGCL/KDR-siRNA重组质粒.A549干扰组KDRmRNA表达率下降,KDR蛋白表达量明显减少,细胞周期改变.结论 构建的pGCL/KDR-siRNA表达载体可在mRNA和蛋白水平上有效抑制A549细胞株KDR基因的表达.