人肝癌细胞氧化应激模型中热休克蛋白90α对20S蛋白酶体功能的影响

摘要

目的 观察人肝癌细胞氧化应激模型中细胞内Hsp90α和20S蛋白酶体的表达的变化以及Hsp90α表达下调后对20S蛋白酶体功能的影响；明确热休克蛋白90α对20s蛋白酶体功能的影响.方法 以500μM H2O2建立氧化应激HepG2细胞模型；通过ROS探针法观察细胞在不同氧化应激条件下ROS的分布和含量,通过MTT比色法观察氧化应激对细胞存活的影响；以免疫印迹方法检测氧化应激对细胞内Hsp90α及20S蛋白酶体的合成的影响；以pSilencer 2.1-U6 neo载体,用电穿孔法建立稳定的Hsp90α抑制表达细胞株,通过检测糜蛋白酶活性观察氧化应激和降低Hsp90α表达对蛋白酶体活性的影响.结果 氧化应激后细胞内ROS的含量增多,且分布从胞浆向胞核转移；随着作用时间延长,H2O2对HepG2细胞增殖的抑制程度增强；氧化应激导致胞内Hsp90α表达量先增加后降低,20S蛋白酶体表达量明显降低；siRNA干扰组蛋白酶体活性显著下降.结论 氧化应激可影响细胞内Hsp90α和20S蛋白酶体的表达并改变其细胞内分布；氧化应激及降低Hsp90α的表达均可影响蛋白酶体的活性；Hsp90α对蛋白酶体功能维持起保护性的作用.