定量沉默c-Met基因表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和化疗敏感性的影响

摘要

目的探讨定量沉默c-Met基因表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、表阿霉素化疗敏感性的影响及其可能机制。方法设计3条针对c-Met基因不同位点短发夹RNA(shRNA)片段,瞬时转染MDA-MB-231细胞,挑选出沉默效率最佳的shRNA,并设定scramble为阴性对照组,MDA-MB-231细胞为空白对照组。将沉默效率最佳的TA-shRNA连接到PSD400慢病毒载体中进行病毒包装,收集病毒液并感染MDA-MB-231细胞,利用嘌呤霉素筛选出稳定表达针对c-Met的shRNA细胞系(PSD400-c-Met-shRNA-MDA-MB-231)及阴性对照组细胞(PSD400-scramble-MDA-MB-231)。利用多西环素(DOX)诱导稳定细胞系,Western blot检测稳定细胞系c-Met蛋白表达水平,噻唑蓝(MTT)法检测敲低c-Met后对稳定细胞系增殖的影响。将诱导的稳定细胞系加入不同浓度表阿霉素,MTT法检测不同浓度表阿霉素作用对稳定细胞系存活率的改变,计算出药物半数抑制浓度(IC_(50));流式细胞技术检测细胞凋亡情况;Western blot检测凋亡相关蛋白多聚二磷酸腺苷(ADP)-核糖聚合酶(PARP)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达。结果稳定细胞系PSD400-c-Met-shRNA-MDA-MB-231经DOX诱导后细胞生长受到明显抑制,且加入不同浓度表阿霉素处理细胞后,细胞的存活率和IC_(50)均明显降低(P<0.05);同时G_(0)/G_(1)期细胞百分比明显升高,S期、G_(2)/M期细胞百分比明显降低(P<0.05)。Western blot检测凋亡相关蛋白PARP和caspase-3上调明显。结论定量沉默c-Met基因可以抑制MDA-MB-231细胞的增殖,促进细胞凋亡,并提高了MDA-MB-231细胞的化疗敏感性,靶向c-Met基因可能是治疗乳腺癌的有效方法。