HIF1α/HIF2α经EGF调控胶质瘤细胞化疗抵抗机制研究

摘要

目的通过体外实验探讨低氧诱导因子1α(HIF1α)和HIF2α经表皮生长因子(EGF)调控胶质瘤细胞化疗抵抗的机制。方法采用CRISPR-CAS9系统单独或同时敲除U87细胞HIF1α和HIF2α表达(分为HIF1α单独敲除组、HIF2α单独敲除组、HIF1α/HIF2α同时敲出组),另设未转染的U87细胞为对照组。缺氧或常氧培养各组细胞并给予替莫唑胺(TMZ)处理,检测各组细胞毒性率和凋亡率。缺氧培养HIF1α/HIF2α同时敲出组的U87细胞,RT-qPCR检测EGF mRNA表达水平,进一步在培养基中添加EGF后予以TMZ处理,检测细胞毒性率和凋亡率。结果Western blot提示U87细胞HIF1α和HIF2α敲除成功。缺氧条件下,HIF1α和HIF2α单独敲除组及HIF1α/HIF2α同时敲除组EGF表达水平较对照组显著降低(P0.05),HIF1α/HIF2α同时敲除组细胞毒性率高于对照组及HIF1α、HIF2α单独敲除组(P<0.05);TMZ处理的HIF1α、HIF2α单独敲除组及HIF1α/HIF2α同时敲除组细胞凋亡率均高于对照组(P<0.05),HIF1α/HIF2α同时敲除组细胞凋亡率高于HIF1α、HIF2α单独敲除组。缺氧条件下,HIF1α/HIF2α同时敲除组添加EGF后,TMZ处理的细胞毒性率和细胞凋亡率均低于未添加EGF的HIF1α/HIF2α同时敲除组(P<0.05)。结论HIF1α和HIF2α经EGF促进胶质瘤细胞化疗抵抗。