乙型肝炎病毒c抗原特异性T细胞系的建立及CTL克隆的筛选

摘要

目的：建立乙型肝炎病毒（HBV）抗原特异性T细胞系，并筛选得到抗原肽特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）克隆。方法通过流式细胞染色方法鉴定出1例急性乙型肝炎患者的人类白细胞分化抗原（HLA）为HLA‐A2型，分离患者外周血单个核淋巴细胞（PBMCs）；用重组人HBVc抗原（HBcAg）刺激PBMCs建立抗原特异性T细胞系；用HBcAg抗原肽刺激和有限稀释方法，筛选出HBcAg抗原肽特异性CTL克隆；以固相酶联免疫斑点技术（ELISPOT）和乳酸脱氢酶（LDH）细胞毒试验对HBcAg特异性T细胞系和CTL克隆进行功能鉴定。结果建系后HBcAg特异性T细胞明显得到富集，有限稀释后获得15株CTL克隆，其中14株表现出明显的HBcAg抗体肽特异性，包括抗原肽Core18‐27特异性CTL克隆8株，抗原肽Core107‐115特异性CTL克隆4株，另外2株CTL克隆对2条HBcAg抗原肽有交叉反应性。结论成功建立HBcAg抗原特异性T细胞系和CTL克隆，为后续试验奠定基础。