天料木中异香豆素糖苷化合物对MC3T3-E1细胞增殖、分化及OPG/RANKL/RANK信号通路的影响

摘要

目的探讨天料木中异香豆素糖苷化合物4-hydroxy-2-{[(benzoyl) oxy]methyl}phenyl-β-D-glucopyranoside-6-benzoate(HPGB)对小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1细胞活性的影响及其作用机制。方法体外培养MC3T3-1细胞,用不同浓度的异香豆素糖苷化合物进行干预,采用MTT法测定MC3T3-1细胞增殖情况,碱性磷酸酶(ALP)测定细胞分化情况,悬液芯片技术检测、分析糖蛋白Dickkop(DKK-1)、骨保护素(OPG)、骨桥蛋白(OPN)、骨钙素(BGP)和核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)蛋白表达水平。Real-time PCR法检测、分析DKK-1、RANKL mRNA的表达水平。结果异香豆素糖苷化合物在3~300μmol/L可促进MC3T3-E1细胞增殖和分化能力,具有浓度相关性;与正常对照组相比,异香豆素糖苷化合物可提高MC3T3-E1的ALP活性。蛋白结果表明,异香豆素糖苷化合物可显著上调MC3T3-E1细胞中OPG、OPN的表达,DKK-1、RANKL蛋白表达无明显变化,但显著提高了OPG/RANKL值。同时,mRNA结果显示异香豆素糖苷化合物可显著上调MC3T3-E1细胞中OPG mRNA表达,显著提高OPG/RANKL值。结论异香豆素糖苷化合物可通过上调OPG、OPN的表达、提高OPG/RANKL值,促进MC3T3-E1的增殖和分化。