CYP1A1体外诱导活性评价模型的建立及其在人参皂苷筛选中的应用

摘要

目的建立hAhR介导的CYP1A1体外诱导活性评价模型,应用于体外快速筛选通过hAhR途径介导的对CYP1A1具有激活能力的药物。方法利用双荧光素酶报告基因系统,将CYP1A1启动子序列插入报告基因质粒上游,构建pGL4.17-CYP1A1质粒,并与含有hAhR编码区序列的pcDNA3.1-hAhR表达质粒瞬时共转染HepG2细胞, pGL4.17-control、pcDNA3.1(+)分别为pGL4.17-CYP1A1、pcDNA3.1-hAhR的空载体,建立hAhR-CYP1A1报告基因模型;应用AhR的完全激动剂TCDD(2 nmol/L)验证该报告基因模型的可靠性,应用该模型考察人参皂苷Rf、Rc、Re、Rg1、Rb、Rd、Rh2和Rg3(20μmol/L)通过hAhR途径对CYP1A1的诱导作用。结果经验证,报告基因模型构建成功;人参皂苷Rf、Re、Rg1和Rc对AhR具有激活作用,其中与对照组比较,人参皂苷Rg1、Rc对AhR激活效应显著(P<0.05、0.01),人参皂苷Rb、Rd、Rh2和Rg3对AhR无激活作用。结论本研究建立基于hAhR的CYP1A1体外诱导活性评价模型,可为具有潜在CYP1A1诱导作用的目标化合物的筛选提供有效、快速的体外筛选手段,人参皂苷Rg1、Rc对AhR-CYP1A1激活效应显著。