马铃薯Y病毒一步 RT-PCR 检测试剂盒的研制

摘要

马铃薯 Y 病毒 (Potato virus Y,PVY) 对马铃薯的危害最大,可导致马铃薯退化,降低马铃薯产量.解决这一问题的重要途径就是培养脱毒种薯,但是否完全脱毒需要经过检测才能证实.本研究依据 PVY CP 基因序列设计合成了一对引物 PY1、PY2,以带毒样品植物总 RNA 为模板,在同一个反应中同时加入反转录和 PCR 反应所需试剂,反应程序中包括反转录和 PCR 反应所需条件,进行反应扩增,带毒样品扩增得到340 bp 的目的条带,而健康对照无此目的条带,从而建立了PVY的一步 RT-PCR 检测技术,并组装成试剂盒.该试剂盒具有良好的稳定性和特异性,灵敏度可以检测到带毒植物组织下限的6.25μg,高于 ELISA (100μg) 和 NAsH (15μg) 的灵敏度,虽然和常规方法的灵敏度相同,但更为快速、简便、易于操作,适合脱毒苗和脱毒种薯生产单位做大量样品的检测.