采用蛋白质组学技术研究罗布麻总黄酮抗EA.hy926细胞损伤作用机制

摘要

目的应用同位素标记的绝对与相对定量（iTRAQ）蛋白质组学技术联合Q-Exactive质谱仪对罗布麻总黄酮（total flavonoids of Folium ApocyniVenet,TFF）作用前后EA.hy926细胞的蛋白质表达谱进行检测,找出差异蛋白,并对其进行生物信息学分析,以探讨TFF抑制H2O2诱导的EA.hy926细胞损伤的作用机制.方法（1）采用MTT法检测TFF各浓度的细胞毒性和最有效剂量.（2）分别提取正常组,模型组,罗布麻总黄酮组蛋白,酶解后用不同的iTRAQ试剂标记,混合后采用Q-Exactive质谱仪鉴定,并用PD（Proteome Dis-coverer1.3,thermo）和mascot2.3.0进行定性和定量分析,筛选差异表达蛋白并对其进行生物信息学分析.结果（1）36mg·L^-1的TFF能较好的减少H2O2导致的细胞凋亡.（2）实验共鉴定出蛋白3628个,以两组比值≥1.2或≤0.8为差异蛋白定量标准,H2O2刺激后导致其中250个蛋白表达发生变化（两组比值〉1.2倍或〈0.8倍）,经TFF治疗可改善87个蛋白的异常表达趋势,其中上调54个,下调33个,包括血红蛋白δ亚基（HBD）,硫氧还蛋白结构域蛋白15（TXD15）,溶质载体家族12成员6（S12A6）,组织因子途径抑制物（TFPI）,血小板衍化生长因子β（PA1B2）等蛋白.结论TFF能改变H2O2导致的差异蛋白表达情况,这些蛋白富集于细胞周期,细胞骨架,细胞凋亡等多种生物学功能,形成庞大的相互作用网络,协同发挥抗凋亡作用.