乙酰胆碱酯酶抑制剂微量筛选模型的比较研究

摘要

目的 为新药发现阶段乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)抑制剂的筛选提供实用的微量筛选方法.方法 分别以电鳗AChE、大鼠大脑匀浆、蛇毒AChE为酶源,以96孔板为载体,在生理pH值和温度的条件下,用正交试验法研究酶浓度、底物浓度、反应时间、显色剂浓度对酶反应速率的影响,确定酶反应最佳条件.在研究样品溶媒DMSO对酶反应的影响和SDS终止酶反应的效果后,最终确定筛选模型运行条件并对492种贵州民族药植物提取物进行筛选研究.结果 采用上述3种酶源均成功构建了微量化的AChE抑制剂筛选模型.筛选结果 表明,电鳗AChE有较高的筛选灵敏度,而蛇毒AChE的筛选结果 则与大鼠大脑匀浆的筛选结果 有较好的一致性.结论 以上述3种具有代表性的酶源构建的AChE抑制剂微量筛选模型均具备了简便、快速、可靠、经济、灵活的优点.其中电鳗AChE最适合用于新药发现阶段粗提物样品的筛选,而高纯度的蛇毒AChE更适合用于从化合物库中大规模筛选AChE抑制剂.