表达白介素-23基因的重组纯化及其对妊娠期哮喘气道炎症状态下免疫应答产生的影响

摘要

目的 研究IL-23融合基因免疫调节及其生物学功能与妊娠期哮喘气道炎症的相关性.方法用构建表达IL-23 p40+p19双亚基真核表达质粒转化E.coil BL21菌,IPTG诱导表达产物纯化后,通过SDS-PAGE和蛋白质印迹法进行检测;荧光显微镜及Western blot法鉴定重组蛋白介导质粒转染结果,凝胶电泳迁移实验测定核蛋白的DNA结合活性变化;ELISA法、HE染色分析外源蛋白体内转移对小鼠血清炎性因子水平及肺组织炎症损伤影响;流式细胞术验证外周血单个核细胞中CD4+T细胞亚群比例.结果 成功获得可溶性重组外源蛋白可跨膜转运,并有效介导EGFP进入目标细胞,其稳定表达及转录活性均高于单纯质粒转染效应;GST/pCEP4-IL-23特异结合质粒DNA形成大分子复合体使凝胶迁移率降低;与LPS共同作用,明显增加致敏小鼠血清IL-17A含量(P＜0.05)和肺组织炎症病理反应程度;降低患者外周血IFN-γ、Foxp3水平,促进IL-4、IL-17A活化,进而升高Th2/Th1和Th17/Treg比值(P＜0.05).结论 重组IL-23蛋白具有致病性,参与妊娠哮喘炎症调控,CD4+T亚群免疫失衡共同对妊娠母体免疫耐受及疾病发生发展产生影响.