UDP-3-O-(R-羟基十四酰)-N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰基酶的表达、纯化及与ACHN-975复合物的X-射线衍射分析

摘要

目的 以UDP-3-O-(R-羟基十四酰)-N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰基酶(LpxC)-ACHN-975晶体复合物结构为基础,研究小分子与靶蛋白的结合位点与方式,进而依据复合物结构设计该化合物,以获得活性强、毒性低的药物小分子.方法 运用大肠杆菌表达系统对超嗜热菌(Aquifex aeolicus)来源的AaLpxC进行异源表达,采用Zn2+-NTA亲和层析、Q-HP强阴离子交换色谱和Superose 12分子排阻色谱对重组蛋白进行分离纯化,对AaLpxC进行结构生物学研究,采用蒸汽扩散-悬滴法进行结晶条件筛选以及优化.结果 获得纯度在90％ 以上的超嗜热菌来源的AaLpxC,经过结晶条件的优化获得分辨率为1.21?(1?=1×10-10 m)的AaLpxC与ACHN-975的复合物晶体的衍射数据,其晶胞参数为a=65.569?,b=65.569?,c=131.595?,α=90.000°,β=90.000°,γ=120.000°.结论 ACHN-975与AaLpxC复合物晶体结构的获得有望对ACHN-975小分子结构优化及设计提供指导方向及重要依据.