PCR和DNA斑点杂交分析贝氏柯克斯体的核酸标识

摘要

目的确认贝氏柯克斯体特异的核酸标识.方法用PCR法特异扩增贝氏柯克斯体24kDa, 27kDa、30kDa、34kDa、热休克蛋白B等表面蛋白基因,以及23S rRNA插入序列和16S-23S rRNA 间区序列等基因片段,从DNA电泳凝胶中回收纯化PCR扩增的目的DNA片段,用地高辛随机引物标记法标记目的DNA片段作探针,行DNA斑点杂交.结果 PCR扩得的7个贝氏柯克斯体DNA片段探针只能与贝氏柯克斯体基因组DNA杂交而不能与其他种属的立克次体的基因组杂交,每种探针检测同源目的基因的灵敏度可达到10pg.结论这7种贝氏柯克斯体DNA片段是贝氏柯克斯体特异的DNA片段,可作为贝氏柯克斯体的核酸标识,基于它们的序列设计的引物和探针具有极高的贝氏柯克斯体种特异性.