双氢青蒿素对蓝氏贾第鞭毛虫滋养体蛋白质的损伤

摘要

目的 探讨双氢青蒿素 (dihydroartemisinin,DHA) 对体外培养的蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)滋养体蛋白质的损伤作用.方法 用改良TYI-S-33培养基培养蓝氏贾第鞭毛虫滋养体;设立实验组(DHA组)和正常对照组(C组).实验组用含双氢青蒿素的培养基(含LC50＝200μg/mL的DHA)培养;对照组培养基不含药物.提取各组虫体总蛋白,经Bradford法进行蛋白质定量,样本经2D-电泳和硝酸银染色后, 扫描检测凝胶电泳图蛋白点的数量和种类,获取蛋白质点匹配信息,挑选匹配性高的蛋白点,进行质谱(MALDI-TOF MS)分析.结果 经双氢青蒿素作用后虫体总蛋白质含量(0.6993μg/mL)明显低于对照组(4.8241μg/mL),二者差异有显著性(P <0.001).蛋白质二维电泳凝胶图分析结果显示,正常对照组(C组)蛋白点密集,约1253个点,布满整块凝胶,蛋白表达量高(蛋白点颜色深且清晰、明亮);与此相反,实验组(DHA组)蛋白点显著减少,DHA作用6h后约617个点,作用12h后约326个点,蛋白表达量明显降低(蛋白点颜色浅,不清晰).其次,正常对照组与双氢青蒿素组的12kDa～30kDa、等电点pI 3.0～7.6范围内蛋白点表达量存在明显差异,即实验组该范围内大多数蛋白点完全消失, 45kD～60kDa的蛋白点仅剩6个点.质谱分析鉴定结果显示,在正常对照组胶图所选的80个匹配良好的蛋白点中,鉴定出6种骨架蛋白(14个点),而实验组(DHA组)蛋白胶图中相对应的蛋白点消失.结论 双氢青蒿素对蓝氏贾第鞭毛虫滋养体的蛋白质具有明显的损伤作用,其中包括细胞骨架蛋白.