应用16S rDNA克隆文库筛查腹泻病暴发病原体及特异毒力基因验证

摘要

目的 以16S rDNA克隆文库筛查某地腹泻病暴发的病原体,并验证筛查结果 的可靠性.方法 收集12份暴发期内腹泻患者的粪便标本,抽提粪便中总细菌基因组,随机抽取3例患者,应用中国传染病预防控制国家重点实验室建立的16S rDNA克隆文库方法 筛查可能的致腹泻病原菌,根据筛查结果 ,设计致腹泻病原菌特异性毒力基因的引物进行PCR验证,同时对其它9份粪便标本进行该致病菌的PCR检测,根据致病菌的检出比例,确定可能导致本次腹泻病暴发的病原体.结果 用16S rDNA克隆文库在3例患者标本中筛查到2例可能存在志贺菌或大肠杆菌,用针对志贺菌的特异性毒力基因ipaH对该2例患者标本进行PCR检测为阳性.在其它9例腹泻患者粪便标本中6例检测到志贺菌,志贺菌在腹泻病例中的总检出率为66.7%(8/12).16S rDNA克隆文库筛查结果 与志贺菌ipaH基因的验证结果 均显示,3号病例的志贺细菌基因组在粪便总细菌基因组中所占的比例比2号病例高,两种检测结果 具有一致性.结论 志贺菌可能是导致某地本次腹泻病暴发的主要病原体.16S rDNA基因克隆文库法能快速筛查到可能的病原菌,其筛查结果 比较可靠,因此,该方法 对于不明原因疾病暴发流行的病原体筛查具有指导作用.