四种结核分枝杆菌特异性抗原的克隆表达与血清鉴定

摘要

目的克隆结核分枝杆菌14 000、37 000、ESAT-6与mtb81抗原基因,于原核表达系统进行表达并纯化,测定抗原性与特异性.方法利用聚合酶链反应(PCR)自结核分枝杆菌基因组DNA扩增14 000、38 000、ESAT-6与mtb81抗原基因,经测序鉴定后克隆于pGEX 4T-1表达载体,转化于大肠杆菌BL21菌株进行诱导表达,利用亲和层析纯化表达产物,通过酶联免疫吸附测定(ELISA)检测其抗原性与特异性.结果携带重组质粒的菌株经诱导产生高水平的表达产物,纯化的表达产物具备较高的纯度、抗原性与特异性.其中38 000、14 000、ESAT-6及mtb81抗原的阳性检出率分别为54%、60%、44%及36%.4种抗原联用阳性检出率可达86%.结论 14 000、38 000、ESAT-6与mtb81重组抗原具备良好的抗原性与特异性,有望应用于结核分枝杆菌的临床诊断.