腺病毒E1A蛋白对核因子-κB活化的影响及N-乙酰半胱氨酸的干预作用

摘要

目的探讨腺病毒E1A蛋白（E1A蛋白）对转录因子核因子-κB（NF-κB）、活化蛋白-1（AP-1）转录活性的影响以及抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）干预作用。方法构建稳定表达E1A蛋白的大鼠肺泡上皮细胞（E1A组）及对照质粒转染细胞（对照组）,每组5×10~5个细胞,试验重复3次。采用脂多糖和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）进行刺激,NAC进行干预,荧光素酶报告基因检测系统分析核因子-κB和AP-1转录活性的变化,Western blot法检测核因子-κB和AP-1蛋白的表达。两个样本均数的比较采用t检验,多个样本均数的比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验,结果荧光素酶活性（相对光单位）:刺激前E1A组为9 698±98,在脂多糖和TNF-α刺激后分别为101 195±234和170 385±443,均明显高于对照组（2 077±107、67 846±332和95 743±211）;刺激前转染AP-1的E1A组为9 034±78,在脂多糖和TNF-α刺激后分别为26 343±398和31 731±332,均明显高于对照组（2 845±93、10 772±432和11 005±556）。细胞内核因子-κB蛋白表达（积分吸光度值）:刺激前E1A组分别为79.3±4.6和80.3±3.8,在脂多糖和TNF-α刺激后分别为81.8±3.9～89.9±1.6和94.1±1.9～99.8±1.6,均明显高于对照组（刺激前分别为68.3±3.8和69.4±4.3,刺激后分别为70.1±2.8～80.8±3.6和73.4±4.9～83.2±6.7）;在脂多糖和TNF-α作用后E1A组细胞核内AP-1蛋白表达的积分吸光度值（72±4～73±4和83±4～86±8）与对照组（71±4～74±7和84±6～86±6）无明显差别。给予NAC预处理后再用脂多糖和TNF-α刺激,E1A组核因子-κB蛋白表达的积分吸光度值（1.98±0.20和1.90±0.20）明显低于脂多糖或TNF-α单独作用组（3.20±0.10和3.30±0.10）。结论腺病毒E1A蛋白持续表达可引起细胞内核因子-κB的过度活化,抗氧化物质NAC能明显拮抗E1A蛋白上调核因子-κB活化的作用,推测其机制可能与氧化应激有关。