腺病毒介导的肿瘤生长抑制因子4和白细胞介素-24双基因共表达对肺腺癌放疗增敏的体内外实验研究

摘要

目的研究肿瘤生长抑制因子4（ING4）和白细胞介素-24（IL-24）双基因共表达腺病毒载体对肺腺癌细胞SPC-A-1的体内外放疗增敏作用及其潜在的作用机制。方法用Western blot法检测ING4和IL-24在SPC-A-1细胞中的表达;四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法和流式细胞仪分别检测Ad-ING4-IL-24联合放疗对SPC-A-1肺腺癌细胞的生长抑制作用和促凋亡作用。应用抽签法将25只裸鼠随机均分为5组:PBS组、腺病毒（Ad）组、双基因组、放疗组及联合组,除放疗组外其余各组均采用瘤体内注射干预用药,隔日1次,共注射6次。第1次治疗前及开始治疗后隔日测量各组瘤体的长径（L）和短径（W）,计算瘤体体积（V=L×W~2/2）,绘制瘤体体积-时间变化曲线。采用SPC-A-1细胞株建立肺腺癌裸鼠模型,观察Ad-ING4-IL-24联合放疗对移植瘤的抑制作用。免疫组织化学法检测天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）及血管内皮细胞生长因子（VEGF）基因的表达。采用金正均法计算q值并判断其放疗增敏作用。结果 Western blot法检测结果显示,目的基因在SPC-A-1细胞中成功表达;MTT和流式细胞仪检测结果显示,Ad-ING4-IL-24联合放疗组对SPC-A-1细胞的生长抑制和促细胞凋亡作用[（86.2±0.8）%、（60.9±1.0）%]明显高于Ad-ING4-IL-24双基因组[（49.8±0.3）%、（26.3±1.3）%]和放疗组[（44.4±2.2）%、（33.3±0.8）%]（生长抑制率比较,F=550.88,P＜0.01;凋亡率比较,F=614.08,P＜0.01）,Ad-ING4-IL-24联合放疗具有放疗增敏协同作用（q=1.20）;裸鼠体内瘤重抑瘤率Ad-ING4-IL-24组、放疗组及Ad-ING4-IL-24联合放疗组分别为49.5%（样本5只）、35.4%（样本5只）和79.8%（样本5只）,Ad-ING4-IL-24联合放疗能明显抑制移植瘤生长,具有放疗增敏协同作用（q=1.18）;免疫组织化学法检测结果显示,Ad-ING4-IL-24联合放疗可明显上调Bax和Caspase-3基因表达,下调Bcl-2及VEGF基因表达。结论 Ad-ING4-IL-24具有放疗增敏作用,是理想的放疗增敏剂,其作用机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡和抑制血管形成有关。