根癌农杆菌介导的柑桔遗传转化技术

摘要

以新会橙、锦橙(Citrus Sinensis Osb.)胚状体以及北碚447锦橙、纽荷尔脐橙(C.Sinensis Osb.)田间成年树腋芽为转化起始材料,经含外源抗菌肽基因(Shiva A和Cecropin B)的根癌农杆菌感染后,比较了胚状体在不同培养基中丛芽的诱导频率和卡那霉素(Km)质量浓度对胚状体丛芽生长以及最终转化频率的影响,也对成年树腋芽在不同BA、IAA质量浓度处理、不同创伤部位和是否用石蜡带(Parafilm)包裹创伤口的诱芽和转化率进行了研究.PCR检测和Southern blot分析证明外源抗菌肽基因(Shiva A和Cecropin B)已导入上述4个柑桔品种;离体抑菌试验证明转基因植株叶片提取液对溃疡病菌有一定的抑制作用.建立了一个简便、快捷、通用的柑桔遗传转化体系.