基于二氢卟吩e6的光动力疗法联合替硝唑对牙周炎大鼠协同治疗作用的研究

摘要

目的探讨基于二氢卟吩e6（chlorin e6, Ce6）的光动力疗法（photodynamic therapy, PDT）联合抗生素替硝唑（tinidazole, TNZ）对牙周炎大鼠的体内外抑制作用。方法采用正畸钢丝结扎法对18只SD大鼠建立牙周炎模型, 建模成功后按随机数字表法随机分为以下6组（每组3只）:阳性对照组、Ce6 组、TNZ 组、混合物Ce6/TNZ 组、Ce6加光照（Ce6+L）组、Ce6/TNZ加光照（Ce6/TNZ+L）组;采用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium, MTT）实验考察Ce6（质量浓度为0～20 mg/L）、TNZ（质量浓度为0～16.6 mg/L）及其混合物Ce6/TNZ对成纤维细胞L929的毒性;采用荧光探针法检测Ce6、TNZ和Ce6/TNZ及结合635 nm激光照射（功率0.5 W/cm2, 时间5 min）对牙周炎大鼠牙菌斑生物膜中活性氧生成的触发效应, 评价Ce6的光动力性能;采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8, CCK-8）实验和活菌/死菌染色法考察各种治疗的体外抗菌性能, 并计算Ce6介导的PDT联合TNZ的合用指数（combination index, CI）。采用凋亡试剂盒流式检测各种治疗对鼠巨噬细胞RAW264.7凋亡的诱导效应。各组大鼠局部给药后行激光照射（功率0.5 W/cm2, 时间5 min）, 治疗结束后用显微CT评价PDT联合TNZ对牙周炎大鼠牙槽骨吸收的抑制效应。结果 Ce6、TNZ、Ce6/TNZ在预设浓度范围内L929细胞存活率均在90%以上。激光照射后, Ce6与Ce6/TNZ的牙菌斑生物膜中呈现出非常显著的绿色荧光, 触发了菌斑内活性氧大量生成;但在不同浓度下, Ce6/TNZ的牙菌斑存活率分别为（85.4±5.5）%、（76.0±8.9）%、（61.7±0.6）%、（56.3±2.6）%、（43.5±0.6）%, 均显著低于Ce6和TNZ组（P＆0.01）, 且各药物浓度点对应的CI＆1.0, 具有显著的协同效应。Ce6+L与Ce6/TNZ+L具有显著强于Ce6与Ce6/TNZ的细胞凋亡诱导活性（P＆0.01）。牙周炎大鼠体内, Ce6/TNZ联合激光照射能有效抑制牙槽骨的吸收, 牙槽骨体积、骨体积分数分别为（1.49±0.07）mm3和（47.08±0.71）%, 颊、腭侧釉质牙骨质界至牙槽嵴顶距离分别减小至（2.13±0.07）和（1.94±0.10）mm。结论基于Ce6的PDT联合抗生素TNZ对牙周炎大鼠有协同治疗作用, 能有效杀伤牙菌斑, 诱导巨噬细胞凋亡, 抑制牙槽骨吸收。