缺氧对口腔扁平苔藓角质形成细胞增殖及缺氧诱导因子1α、血管内皮生长因子、基质金属蛋白酶9表达的影响

摘要

目的探讨缺氧对人口腔扁平苔藓（oral lichen planus,OLP）角质形成细胞增殖及缺氧诱导因子1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）及基质金属蛋白酶9（matrixmetalloproteinase-9,MMP-9）表达的影响,以期为OLP发病机制的研究提供新思路。方法体外分离培养OLP角质形成细胞;使用密闭培养箱模拟缺氧环境,分为常氧组和缺氧组,两组细胞分别培养12、24、36及48h,采用细胞计数试剂盒8的方法监测缺氧各时点细胞增殖状况,并确定进一步实验干预时间点,每组实验均重复3次;SYBR Green I荧光染料实时定量PCR法和蛋白质印迹法分别检测各组细胞HIF-1α、VEGF、MMP-9 mRNA和蛋白表达水平,并采用相关性分析研究VEGF、MMP-9与HIF-1α的相关性。结果 24、36、48 h缺氧组OLP角质形成细胞增殖力（A值）（分别为0.340±0.002、0.415±.0.006、0.546±0.006）均显著低于同时间点常氧组（分别为0.431±0.001、0.620±0.004、1.022±0.005）,P＜0.01;24、36、48h缺氧组VEGF（2.087±0.291、3.189±0.573、5.402±0.563）及MMP-9（2.936±0.500、4.083±0.300、6.374±0.858）的mRNA表达量均显著高于常氧组（P＜0.05）,HIF-1α（0.414±0.093、0.751±0.056、0.875±0.040）、VEGF（0.393±0.046、0.557±0.078、0.767±0.045）及MMP-9（0.250±0.053、0.384±0.038、0.611±0.092）的蛋白表达量均显著高于常氧组（P＜0.05）。HIF-1α与VEGF（r=0.905,P=0.000）及MMP-9（r=0.881,P=0.000）的蛋白表达水平均呈显著正相关。结论缺氧在一定时间内可抑制OLP角质形成细胞增殖,上调细胞中HIF-1α蛋白、VEGF及MMP-9 mRNA和蛋白的表达;缺氧环境下HIF-1α可能通过调控下游靶基因参与OLP的病情进展。